人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，简称HPV）是一种常见的性传播病毒，目前已被广泛认可为宫颈癌的主要病因之一^[1]。高危型HPV感染可引发宫颈上皮细胞的恶性变，从而导致宫颈癌的发生。随着宫颈癌的高发率以及HPV感染人群的增加，早期的诊断和治疗成为预防宫颈癌的关键。PCR检验作为一种敏感、快速、准确的分子生物学方法，具有检测HPV感染的潜力^[2]。宫颈癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，每年造成大量的死亡。据统计，在过去几十年里，宫颈癌的发生率一直呈上升趋势，特别是发展中国家。高危型HPV感染是宫颈癌发生的主要原因之一，其中HPV16和HPV18是最常见的高危型HPV亚型。早期诊断和治疗可以显著降低宫颈癌患者的死亡率和病情恶化的风险，因此，寻找一种敏感、准确、快速的检测方法对于宫颈癌的预防和治疗至关重要。本研究旨在对PCR检验在高危型HPV感染的诊断中的价值进行分析^[3]。通过运用PCR技术，可以检测出高危型HPV的存在与否，从而帮助医生早期发现和治疗宫颈癌。本研究将探讨PCR检验的敏感性和特异性，评估其在高危型HPV感染筛查和诊断中的准确性和可靠性。除此之外，还将与其他常用检测方法进行对比，以进一步验证PCR检验在高危型HPV感染的诊断中的优势和应用前景^[4]。本研究将通过对PCR检验在高危型HPV诊断中的价值进行深入分析，为宫颈癌早期筛查和治疗提供具有重要临床意义的依据。该研究的结果能够为疾病的预防和控制提供新的思路和方法，为女性健康保驾护航。具体内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

    分别以感染人乳头瘤病毒患者及同期健康体检者为本次研究对象，各选取80例，选取时间为2021年2月至2023年2月间。其中最大年龄58岁，最小年龄24岁，平均年龄35.26±2.69岁，经过临床病理诊断，已感染的80例患者中，宫颈CNⅠ期32例、CNⅡ期11例、CNⅢ期4例、鳞状上皮病变和慢性宫颈炎33例。

1.2 方法

HC2检测法：（1）收集样本：医生会从妇科检查中采集到宫颈表面的细胞样本。通常是通过使用专用的工具在宫颈上刷取一些细胞或取少量宫颈组织进行活检。（2）样本处理：采集到的样本会经过一系列的处理步骤，以提取其中的DNA。这些处理步骤包括细胞的分离、DNA的纯化等。（3）HC2杂交捕获：在HC2检测中，提取的DNA样本会与一种称为HC2试剂盒中的探针液结合。该探针液是一种含有特异性DNA探针的溶液，这些探针可以与HPV病毒中的特定DNA序列结合。（4）杂交反应：将探针液与DNA样本一起加入一个特定的试剂盒中，然后进行杂交反应。这个反应的目的是使得DNA和探针结合，并形成稳定的复合物。（5）清洗步骤：在杂交后，需要进行一系列的洗涤步骤，去除未与探针结合的DNA和杂质。（6）信号检测：经过洗涤后，残留的复合物会被特定的酶标记抗体检测。这种抗体可以与复合物结合，并产生可测量的信号。（7）结果解读：通过测量信号的强度，可以确定样本中是否存在感染了高危型别的HPV病毒。

实时荧光PCR检测：（1）样品处理：收集人乳头瘤病毒感染相关的样品，如宫颈抹片、尿液、血液等。样品在低温条件下保存，并尽快进行提取。使用商用提取试剂盒提取样品中的核酸（如DNA）。将提取的核酸溶解在适宜的缓冲液中。（2）准备PCR反应体系：选择适合的实时荧光PCR试剂盒，其中包含了PCR扩增所需的酶、引物、探针等。根据试剂盒说明书，配置PCR反应的主要组分，如PCR缓冲液、酶、引物和探针等。（3）设置PCR程序参数：使用实时荧光PCR仪器并打开软件。根据试剂盒说明书设置PCR反应体系的温度、时间和荧光信号采集参数。（4）进行PCR扩增反应：在PCR管或板中加入PCR反应体系（包括提取的核酸和试剂盒中的主要组分）。将PCR管或板放入实时荧光PCR仪中。（5）数据分析：实时荧光PCR仪会自动记录PCR扩增过程中的荧光信号。使用PCR仪器提供的分析软件进行数据分析。根据荧光信号的变化判断样品中是否存在人乳头瘤病毒。

1.3 观察指标

    以酶联免疫法检测结果为标准，对比PCR、HC2两种方式的检测结果，并以此结果，对比两种方法的灵敏度、特异度、准确性；以患者病理结果对比两种检验方式在不同疾病类型的检出率。

1.4 统计学方法

    本研究将使用SPSS23.0软件进行统计分析，其中包含计数资料将以百分比表示，卡方值进行组间验证，计量资料以均数±标准差表示，t值进行组间检验，P＜0.05，有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两种检测方式的检测结果

以酶联免疫法检测结果为标准，对比PCR、HC2阳性检出情况，具体数值可参见表1。

表1 对比两种检测方式结果分析

2.2 检测方式的诊断效能

依据结果2.1的数值，计算两种检测方式的诊断效能，PCR均优于HC2，P＜0.05，具体数值可见表2。

表2 对比不同检测方式的诊断效能（n，%）

2.3 不同疾病类型检出率

通过表3数据可以看出，在宫颈病变分级检测上，两种检出率无较大差异，P＞0.05，在鳞状上皮病变和慢性宫颈炎的检测上，两种检测有明显差异性，P＜0.05。

表3 两种检测对不同疾病的检出率（n，%）

3 讨论

高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）是一类感染人体皮肤和黏膜的病毒，与各种恶性肿瘤的发生密切相关。HR-HPV主要包括HPV16、18、33、45、51、59、68等亚型^[5]。感染后，病毒可潜伏在人体表皮和黏膜的基底细胞中，引起细胞的异常增生和突变，最终导致病变发展为癌前病变和癌症。宫颈癌是HR-HPV感染最常引起的恶性肿瘤之一。病毒感染后，会引起宫颈细胞的异常增殖和突变，形成不同程度的宫颈上皮内瘤变，如宫颈上皮内瘤变Ⅰ级（CINⅠ）、宫颈上皮内瘤变Ⅱ级（CINⅡ）和宫颈上皮内瘤变Ⅲ级（CINⅢ）^[6]。如果未得到及时治疗，这些不同级别的瘤变可能逐渐发展为宫颈癌。HPV16和HPV18是最常见的高危型HPV亚型，被认为是宫颈癌的主要病原体。由于HR-HPV感染与多种恶性肿瘤密切相关，预防和早期检测至关重要。目前，预防HR-HPV感染的主要方法是接种HPV疫苗。疫苗能够有效提高人体对HPV的免疫力，降低感染风险。早期发现和治疗宫颈癌前病变也是预防HR-HPV相关恶性肿瘤的重要手段。通过定期进行宫颈细胞学检查或HPV基因型检测，可以及时发现宫颈上皮内瘤变，进行早期治疗^[7]。

HC2是一种基于杂交捕获技术的HR-HPV检测方法，其在高危型人乳头瘤病毒诊断中具有重要的价值。首先，该方法能够检测出多种高危型人乳头瘤病毒亚型，并可提供相对丰富的亚型信息。其高度敏感的特性使得HC2能够在早期发现HR-HPV感染，从而提供了一个重要的预警信号，帮助医生采取相应的干预措施。其次，由于其使用了HR-HPV亚型特异性的探针，HC2在诊断中能够准确区分出HR-HPV感染和非高危型亚型感染，避免了过度诊断和治疗的风险^[8]。此外，HC2的操作相对简便，只需采集相应的样本后，通过杂交捕获反应即可得到结果。这一点对于一些资源匮乏地区来说尤为重要，因为该方法不需要复杂的设备和技术，有助于提高HR-HPV感染的筛查和诊断水平。然而，HC2在一些方面也存在一些不足之处。首先，HC2方法本身比较昂贵，需要专门的试剂盒和仪器设备，这增加了使用该方法的成本。其次，HC2无法区分出HR-HPV感染的持续性和暂时性，导致在某些个案中可能存在误诊和过度治疗的风险。此外，HC2无法提供HPV E6/E7 mRNA的表达情况，在一定程度上限制了其在判断HR-HPV感染的活跃性和病情的评估^[9]。

实时荧光PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种基于PCR技术的变种方法，可以通过检测荧光信号来定量的检测特定的DNA序列。在高危型人乳头瘤病毒（HPV）的诊断中，荧光PCR具有重要的价值，并且有着其独特的优点和一些缺点。实时荧光PCR在高危型HPV诊断中的价值主要体现在以下几个方面：（1）高灵敏度和高特异性：该方法可以通过放大目标DNA序列进行检测，其灵敏度较高，可以检测到极低浓度的病毒DNA。同时，该方法还可以通过设计特异性引物来降低假阴性结果的产生。（2）定量分析：可以根据荧光信号的强度来定量分析目标DNA序列的存在量，可以对乳头瘤病毒的感染程度进行评估。这对于妇科医生来说是非常重要的，因为不同感染程度的高危型HPV可能需要不同的治疗方案^[10]。（3）高效且快速：此种检测的反应时间短，只需几小时即可完成，因此对于病情需要迅速判断的情况，实时荧光PCR是非常适用的。此外，该方法还可以批量化进行，可以同时检测多个样本，提高检测效率。

综上所述，荧光PCR在高危型HPV诊断中具有其独特的优点，包括高灵敏度、高特异性、定量分析以及高效且快速的特点。然而，由于技术要求较高和成本较高等缺点，需要在实际应用中综合考虑。荧光PCR仍然是高危型HPV诊断中的重要工具，但需要结合具体情况选择合适的方法和技术。

参考文献：

[1]于芳沧.PCR检验法和细菌培养法在阴道细菌检验中的效果对比分析[J].系统医学,2022,7(17):80-83.

[2]应菲菲.实时PCR检验在高危型人乳头瘤病毒诊断中的价值分析[J].实用妇科内分泌电子杂志,2022,9(05):103-106.

[3]唐昕.实时PCR检验在高危型人乳头瘤病毒中的诊断价值分析[J].西藏医药,2021,42(06):21-23.

[4]龚秀敏,尹明.阴道细菌检验利用PCR检验法和细菌培养法的效果[J].中国继续医学教育,2021,13(21):95-97.

[5]冉旭东.实时荧光PCR检验对高危HPV检测的应用价值分析[J].实用妇科内分泌电子杂志,2021,8(19):68-70.

[6]黄晓叶.实时荧光定量多聚核苷酸链式反应在高危型人乳头瘤病毒诊断中的应用价值[J].医疗装备,2021,34(08):31-32.

[7]王波.实时荧光PCR检验对高危HPV检测的应用价值分析[J].现代医学与健康研究电子杂志,2020,4(20):100-101.

[8]樊晓阳.实时荧光定量PCR在高危型HPV感染检测中的应用价值[J].河南医学研究,2020,29(20):3808-3810.

[9]戚华文,刘爵杰,吴铭华.高危型人乳头瘤病毒诊断中实时PCR检验的应用研究[J].中国实用医药,2020,15(17):79-81.

[10]段玲艳,薛家权,梁伟达等.人乳头瘤病毒核酸检测及结果分析[J].名医,2020(01):114-115.