PCR法检测具有敏感度和特异度均较高、操作简便等优势，且可以在较短的时间内获得检测结果^[1]。近年来，PCR试验伴随着分子生物学发展、现代医学发展而广泛应用于临床疾病检验当中。乙肝是一种传播范围极广、危害性极大的常见传染性病症，伴随患者病情进一步发展，极可能演变为慢性肝炎、肝硬化等疾病，严重影响患者的身心健康及生活质量。PCR法检测乙肝DNA有利于临床医务人员鉴别诊断患者的病情，对治疗方案的制定及调整具有重要指导意义，但伴随临床研究逐渐深入，发现检测结果的准确性可受多种因素的影响^[2]。本文将PCR法检测乙肝DNA准确性的相关影响因素作为研究重点，详细内容整理如下。

1资料、方法

1.1资料

本文于研究期内择取100例乙型肝炎病毒感染患者作为观察对象，均为2021年3月至2022年3月入院，以上患者当中，包含44例男性，包含56例女性；年龄统计范围19-73岁，年龄均值求取为（51.76±3.31）岁。

入选标准：经临床检查明确诊断为乙型肝炎病毒感染，且同疾病诊断标准所涉及相关内容相符者；病历资料完整者。

排除标准：并发严重器质性疾病者；精神状态异常，无法配合检验工作者。

1.2方法

所有乙型肝炎病毒感染患者均接受PCR法检测，采集其晨间空腹肘静脉血，将其注入至血清管干燥试管当中。实施离心处理后开展PCR试验。先进行DNA提取，然后取5u模板加入PCR反应体系中上机扩增，于50℃2min→94℃5min 1个循环，完成预变性处理，随后于94℃15s→57℃30s 45个循环进行核酸扩增，遵照试剂盒当中的要求，完成标准曲线的绘制，并根据标准曲线自动计算标本的定量结果。

1.3观察指标

（1）统计以上乙型肝炎病毒感染患者的PCR检验结果。

（2）分析阳性、阴性样本当中，标本实验室环境不佳占比、抗凝血占比、储存不合理占比、核酸提取方法不合理占比、试剂质量不佳占比情况，以明确影响检验结果准确性的相关因素。

1.4统计学处理

本文应用SPSS20.0处理相关数据，计量资料的表述形式为()，计数资料以“%”予以表述，前者施t检验，后者施卡方检验。数据差异明显且存在统计学意义的表述形式为P＜0.05。

2实验结果

2.1 PCR检验结果分析

研究中所纳入的100例乙型肝炎病毒感染患者经PCR检验后，共检出91例阳性，其占比为91.00%；结果呈阴性例数共9例，占比为9.00%。

2.2 PCR法检测乙肝DNA准确性的单因素分析

PCR检验结果呈阴性患者的实验室环境不佳占比、标本抗凝血占比、标本储存不合理占比、核酸提取方法不当占比、仪器准备不当占比、试剂质量不佳占比同阳性患者相比，均明显更高，P＜0.05，详见表1所述：

表1：单因素分析[n（%）]

2.3 多元回归分析

实验室环境良好赋值为0，反之赋值为1；标本抗凝血赋值为1，反之赋值为0；标本存储合理赋值为0，标本存储不合理赋值为1；核酸提取方法合理赋值为0，不合理赋值为1；仪器准备合理赋值为0，仪器准备不当赋值为1；试剂质量良好赋值为0，不佳赋值为1。经多元回归分析，实验室环境不佳、标本抗凝血、标本储存不合理、核酸提取方法不当、仪器准备不当、试剂质量不佳同PCR法检测准确性之间有密切关联，P＜0.05。详见表2所述：

表2：分析PCR法检测准确性的相关影响因素

3讨论

乙肝DNA定量检测可以客观且准确的反映乙型肝炎病毒感染和复制情况，对于临床用药、预后评估而言均具有重要指导作用^[3]。荧光定量聚合酶链反应（PCR）属于目前临床中检测乙肝DNA的主要措施，具有可实时测定、定量范围宽等优势，且测定结果具有良好的重复性^[4]。但是伴随临床研究进一步深入，发现标本因素、PCR扩增因素等均可对检测结果的准确性产生影响。

本次研究中，乙型肝炎感染患者经PCR检测发现，阳性占比为91.00%，阴性占比为9.00%，阴性患者当中实验室环境不佳占比显著更高，提示实验室环境状态同PCR检验结果准确性之间存在密切关联。分析其原因，PCR检测技术的灵敏度较高，若检测过程中一旦有污染情况出现，即可能导致误诊或漏诊情况。为此临床相关工作人员需要严格遵照规范化管理标准、技术验收标准，对实验室区域进行划分，针对实验室的试剂贮存区、标本制备区、扩增区以及扩增产物分析区落实相应的管理对策，将实验室内相关工作人员的培训力度加强，保证其可以准确、规范化完成相关检测操作^[5,6]。

研究结果显示，标本抗凝血占比显著占更高水平，分析其原因，乙肝病毒感染患者的血液当中存在乙肝DNA，将患者的血清和血浆等作为检测标本。通常枸橼酸钠血浆、EDTA血浆等均可用于PCR检测，虽然可结合Ma2+,但是其水平相对更高，对检测结果所产生的影响极小^[7]。相对而言，肝素可以有效抑制聚合酶活性，作为抗凝素可能对标本的裂解产生影响，进而对检验结果的准确性产生不良影响。为此PCR检测过程中，医务人员需要尽可能避免应用肝素。

研究中，检验标本储存不合理占比显著更高，分析其原因，细胞当中的酶可以降解DNA，若检测标本静置的时间＞3h、标本储存环境的温度＞25℃，极可能促使标本发生变性反应。为此，检验室相关工作人员需要分离血清、血浆以后储存检验标本，保证标本存放环境的温度在-20℃^[8]。

研究结果提示，核酸提取方法、仪器准备不当等均可对检测结果的准确性产生影响。分析其原因，不同的核酸提取方法可获得不同的结果，相关工作人员需要结合具体情况，合理选择核酸提取的方式，以提高检测结果的准确性，将病症误诊、漏诊的情况减少；PCR检测对于仪器具有极高的依赖性，扩增仪、以及离心机等任一环节出现问题，均可能影响检测结果的准确性。例如，若扩增仪有孔间差不准确的情况存在，可能降低扩增速率，甚至导致扩增失败^[9]；离心机质量、离心时间等均可影响检测结果，若离心力不足或者离心时间较短，可对后续检测工作的开展产生影响，提高误诊率^[10]。工作人员开展PCR检测相关操作前，需要对相关仪器是否可正常运转展开检查，充分重视清洁消毒工作^[11]。研究中，检测结果呈阴性患者的试剂质量不佳占比显著更高，试剂质量同模板提取、引物位点的选择等有密切关联，任一环节存在问题，均可对检测结果的准确性产生影响^[12]。

将PCR检测乙肝DNA的准确性提升，可以帮助临床医务人员准确判断患者的病情，帮助其为患者制定科学、合理的治疗方案，保证疾病治疗效果，促进患者预后改善^[13]。临床相关工作人员需要深入贯彻PCR检测相关操作规程，落实管理措施，通过定期学习培训、改进管理对策等方式，持续性改进检测工作的质量^[14]；从检测各环节着手落实质控管理措施，保证检测工作的合理性，促进检测相关工作人员专业素养提升，加强设备保养、维护力度，将环境、设备等因素对检测结果准确性所产生的影响减小^[15]。

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