[Abstract] Objective  To investigate the expression and significance of CD3, CD4 and CD8 positive T lymphocytes in the occurrence and development of cervical cancer. Methods By immunohistochemical detection, 80 cases of cervical paraffin sections were taken or removed in our hospital from January 1 to June 31,2022, including 20 cases of cervicitis, 20 low grade intraepithelial lesions (LSIL), 20 high grade intraepithelial lesions (HSIL), and 20 cases of cervical cancer (SCC). By detecting the expression of CD3, CD4 and CD8 positive T cells in cervical tissue with different degrees of the lesions, their significance in the occurrence and development of cervical cancer was predicted. Results  CD3, CD4, CD8 positive T cells were expressed in cervicitis, LSIL, HSIL, and SCC groups, with significant differences between different groups (P <0.001); in the comparison, cervicitis and cervical lesions (LSIL, HSIL, SCC), and between LSIL and SCC groups (P <0.05); respectively, between LSIL and HSIL and SCC (P> 0.05). Conclusion  The expression of CD3, CD4 and CD8 positive T cells increased in the diseased cervical cervix, especially in cervical cancer, but not with the gradual aggravation of cervical lesions.

Key words  Cervical cancer, CD3 CD4 CD8 HSIL LSIL cervicitis, SCC

宫颈癌是全球女性生殖器官常见恶性肿瘤之一，是宫颈上皮内病变进展的必然结果。高危型的人乳头状瘤病毒（high-risk human papillomavirus,HP-HPV）的持续感染是宫颈癌发生的明确病因，宫颈癌是可以早发现，早诊断，早治疗，可防可治的疾病。早预防、早诊断、早干预，降低HPV感染率、降低宫颈上皮内病变的发生率，从而降低宫颈癌发生几率，保护年轻患者的生育力。但如何清除HPV病毒一直困扰着临床医生和患者。关注宫颈局部免疫状态，提高宫颈局部免疫力，加快HPV病毒清除，降低HPV持续感染的几率。因此，本研究通过免疫组织化学方法对比研究CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞在宫颈炎性疾病、低级别宫颈上皮内病变（LSIL）、高级别宫颈上皮内病变(HSIL)、宫颈癌（SCC）的背景淋巴细胞中表达的数量、分布情况以及三者之间的比例变化，了解宫颈局部免疫功能状态，探讨其与宫颈疾病进展是否存在相关性，为宫颈疾病的进展方向提供理论依据，有助于分层管理，阻断宫颈病变进展，从而降低宫颈癌发生几率。

1  资料与方法

一般资料

 随机抽取2019年1月1日至2022年06月31期间，在我院妇科宫颈活组织检查检或手术切除的宫颈蜡块共80例，分别为宫颈炎、低级别上皮内病变（LSIL）、高级别上皮内病变（HSIL)、宫颈癌各20例。年龄在27~64岁之间，平均年龄为43.05岁。排除长期口服类固醇激素或免疫抑制剂的患者；近两周，接受过系统或局部抗病毒治疗的患者；宫颈癌术前进行过新辅助化疗或放疗的患者；临床和病理资料不完善的患者。

方法

通过对蜡块重新进行免疫组织化学染色，在显微镜下观察CD3、CD4、CD8阳性T细胞在背景淋巴细胞中的着色情况，在200高倍镜视野中取出了四个不同视野，每个视野各计数200个细胞。按照阳性细胞染色的数量和显色强度分4级：阳性细胞数为0，不计分；1%-25%计1分；26%-50%计2分；51%-75%计3分，大于75%计4分。染色强度根据着色深浅，按无着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别计0-3分。两项相加：0-1分（-）；2-3分（+）；4-5分（++）；6-7分（+++）。（-）为阴性，（+--+++）为阳性。

2  统计学方法

   使用SPSS 25.0应用软件开展统计数据分析，用X²检验，组间比较（数据Bofferoni校正），P＜0.05统具有统计学差异。

3  结果

3.1.宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组中CD3的表达情况

宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、SCC组中均有CD3表达，不同组别CD3的表达量具有显著性差异(P＜0.001)；进一步组间比较（Bofferoni校正），宫颈炎组与宫颈病变组（LSIL组、HSIL组、SCC组）；LSIL组与SCC组各组间CD3的表达量均具有显著性差异(P＜0.05)；而LSIL组与HSIL组、HSIL组与SCC组各组间CD3的表达量均不具有显著性差异(P＞0.05)。见表1：

表1 宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组CD3的表达情况

3.2.宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组中CD4的表达情况

 宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、SCC组中的CD4阳性率分别为：68.42%、100%、100%、100%，不同组别CD4的表达量具有显著性差异(P＜0.001)；进一步组间两两比较（Bofferoni校正），宫颈炎组与宫颈病变组（LSIL组、HSIL组、SCC组）；LSIL组与SCC组各组间CD4的表达量均具有显著性差异(P＜0.05)；而LSIL组与HSIL组、HSIL组与SCC组各组间CD4的表达量均不具有显著性差异(P＞0.05)。见表2：

表2 宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组CD4的表达情况

3.3.宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组中CD8的表达情况

宫颈炎组、LSIL组、HSIL组、SCC组中的CD8阳性率分别为：47.37%、95%、100%、100%，由X²检验所得结果：不同组别CD8的表达量具有显著性差异(P＜0.001)；组间比较（Bofferoni校正），宫颈炎组与宫颈病变组（LSIL组、HSIL组、SCC组）、LSIL组与SCC组；HSIL组与SCC组各组间CD8的表达量均具有显著性差异(P＜0.05)；而LSIL组与HSIL组组间CD8的表达量均不具有显著性差异(P＞0.05)。见表3：

表3 宫颈炎、LSIL、HSIL、SCC组CD8的表达情况

4 讨论

  近年来，国内外研究发现，较多恶性肿瘤的进展和预后与机体全身和肿瘤局部免疫微环境有着非常密切的关系^[1-3]，细胞免疫在肿瘤患者的血清中表达研究提示：细胞免疫对肿瘤发生发展中起到较为重要的作用^[4-5]。宫颈癌的局部免疫微环境中存在不同的细胞类型，如巨噬细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞等及一部分细胞因子、趋化因子等。较多的研究提示肿瘤局部免疫微环境对肿瘤的发生和发展起着不可忽视的作用^[6-7]。机体组织在正常状态下免疫细胞浸润较少，但当肿瘤发生时，会出现大量的免疫细胞浸润，而肿瘤浸润淋巴细胞中的T淋巴细胞占主要成分，根据细胞表面的抗原表型不同，分为CD4+T细胞或CD8+T细胞两个主要的细胞亚群，同时我们还研究了T细胞的另一个亚型：CD3+T细胞，发现CD3+T细胞作为抗原呈递细胞，可能在宫颈病变进展中起到一定作用，宫颈局部的免疫微环境变化可以由局部病变组织中的免疫细胞表型及他们的数量变化反应出来^[8-10]。

当宫颈感染HPV病毒后，机体可通过以细胞免疫为主的免疫应答清除病毒，其中T淋巴细胞亚群在免疫监视中起着中心调控作用，是重要的免疫效应细胞。根据T细胞表面表达的CD4分子或CD8分子，可分为CD4+或CD8+T细胞两个主要的细胞亚群，其中CD4+T细胞能释放出多种细胞因子参与抗病毒、抗肿瘤效应，在免疫监视、调控过程中起着较为重要的作用，因此CD4+T淋巴细胞的减少可以解释HPV病毒的免疫逃避机制^[11-14]。

近年来，研究宫颈局部免疫微环境的重要性也日益凸显，通过检测宫颈局部T淋巴细胞释放的细胞因子水平，一方面不仅能够准确反映宫颈局部免疫状态，另一方面也可以了解机体对HPV的清除能力。对评估宫颈癌患者病情程度及预测病情发展方向起重要作用^[15-17]。研究还发现，正常宫颈组织中存在CD3、CD4、CD8阳性T细胞表达^[18]。宫颈免疫状态影响着患者HPV转归，从而影响宫颈病变的进展^[19]。研究还发现，CD47在宫颈癌中高表达，与宫颈癌预后明显相关^[20]。 

本研究显示CD3、CD4、CD8阳性T细胞在宫颈炎中表达明显较弱，与在宫颈病变（LSIL、HSIL、SCC）中的表达具有显著性差异，且在宫颈癌中表达明显增强，可能提示：在宫颈组织中如果CD3+T细胞、CD4+细胞、CD8+T细胞表达弱，预测宫颈炎的可能大，如果表达明显增强，提示发展为宫颈癌的可能大，但未明确提示随着病变程度加重，表达逐步增强。本研究未结合HPV感染状态，以后可考虑加大样本量，同时结合HPV感染状态分析，进一步探索是否与HPV转归及宫颈病变程度逐渐加重存在相关性，以帮助预警宫颈病变进展。

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宜宾市健康委员会课题：2021YW007；